現(xiàn)在是時(shí)候與您的血細(xì)胞計(jì)數(shù)器分手了嗎？
時(shí)間：2021-01-05 09:37 點(diǎn)擊次數(shù)：
細(xì)胞培養(yǎng)幾乎總是包括對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)的步驟。無論目標(biāo)是確定傳代的合適接種量，下游實(shí)驗(yàn)的收獲細(xì)胞還是監(jiān)測細(xì)胞健康，細(xì)胞計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性和效率至關(guān)重要。盡管血細(xì)胞計(jì)數(shù)法已用于計(jì)數(shù)細(xì)胞數(shù)十年，但人們越來越認(rèn)識(shí)到它的局限性，導(dǎo)致許多研究人員考慮使用替代方法。借助基于現(xiàn)代Coulter計(jì)數(shù)器的系統(tǒng)，比以往任何時(shí)候都可以更快，更輕松，更一致地進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)-都在方便的手持式設(shè)備中-您和您的血細(xì)胞計(jì)數(shù)器告別了嗎？菌落計(jì)數(shù)器產(chǎn)品
眾所周知，基于血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的細(xì)胞計(jì)數(shù)不準(zhǔn)確
雖然血細(xì)胞計(jì)數(shù)法是最常見的細(xì)胞計(jì)數(shù)方法，可廣泛使用且價(jià)格相對(duì)便宜，但它既費(fèi)時(shí)又容易出錯(cuò)。簡而言之，在典型的基于血細(xì)胞計(jì)數(shù)器的細(xì)胞計(jì)數(shù)過程中，將載玻片放在計(jì)數(shù)室上方；用移液管將10 µL稀釋的細(xì)胞樣品（通常用染色劑，如錐蟲藍(lán)處理）加到血細(xì)胞計(jì)數(shù)器中。使用顯微鏡手動(dòng)計(jì)數(shù)細(xì)胞；然后進(jìn)行計(jì)算以獲得以細(xì)胞/ mL為單位的細(xì)胞濃度。
這些步驟中的每一個(gè)都可能是錯(cuò)誤的主要來源。載玻片放置不充分和移液技術(shù)不佳都會(huì)導(dǎo)致將不正確的體積裝入血細(xì)胞計(jì)數(shù)器，而手動(dòng)計(jì)數(shù)細(xì)胞又是不準(zhǔn)確的另一個(gè)原因-在是否計(jì)數(shù)接觸計(jì)數(shù)邊緣的細(xì)胞時(shí)經(jīng)常會(huì)產(chǎn)生混淆室場，或是否應(yīng)該將細(xì)胞分類為活的還是死的。后一種問題由于許多染色試劑使用不當(dāng)而具有細(xì)胞毒性這一事實(shí)使問題更加復(fù)雜。在計(jì)算階段，錯(cuò)誤也很常見，用戶經(jīng)常無法計(jì)算稀釋系數(shù)，忘記將其除以所使用的計(jì)數(shù)室字段數(shù)，或者乘以除10的四次方之外的其他值確定最終細(xì)胞濃度。
錯(cuò)誤的細(xì)胞計(jì)數(shù)可能是災(zāi)難性的
根據(jù)對(duì)單元進(jìn)行計(jì)數(shù)的原理，將事情弄錯(cuò)的下游影響可能會(huì)有很大不同。在傳代過程中高估了細(xì)胞數(shù)量的情況下，新接種的細(xì)胞群體可能稀疏而無法存活。相反，繁殖過程中細(xì)胞數(shù)量的低估會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞過度擁擠，從而導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生表型變化。使用太少的細(xì)胞進(jìn)行蛋白質(zhì)提取，免疫檢測或功能測定可能意味著目標(biāo)靶標(biāo)無法檢測或結(jié)果偏斜。當(dāng)認(rèn)為數(shù)據(jù)不可靠并且必須重復(fù)實(shí)驗(yàn)時(shí)，對(duì)細(xì)胞健康狀況的不正確評(píng)估可能會(huì)浪費(fèi)時(shí)間和資源。由于這些原因，許多研究人員更喜歡庫爾特計(jì)數(shù)技術(shù)，而不是基于血細(xì)胞計(jì)數(shù)器的細(xì)胞計(jì)數(shù)方法。
