在多重實時PCR(qPCR)中,科學(xué)家使用相同的試劑混合物在同一反應(yīng)中擴增兩個或多個靶基因。復(fù)用允許科學(xué)家克服眾多應(yīng)用的限制。BOEOC熱循環(huán)儀(PCR)
首先,多重操作使科學(xué)家能夠保存用于定量測定的有價值的樣品,這對于涉及難以獲得的標本的研究尤為重要。在單個qPCR實驗中,每個孔中僅擴增目的基因或?qū)φ铡H绻總€測定重復(fù)三次,研究人員需要將樣品分成多個孔以測量基因表達,從而限制了在使用供不應(yīng)求的樣品時可以測試的基因數(shù)量。科學(xué)家通過在同一反應(yīng)中擴增多個基因來克服這些限制。此外,研究人員減少了執(zhí)行qPCR的成本和時間,因為他們每個實驗使用的試劑更少,并且可以運行實驗并更快地分析結(jié)果。由于一次反應(yīng)與多次反應(yīng)相比,移液錯誤也可能被最小化,
多重qPCR在研究和工業(yè)中的應(yīng)用
多重定量PCR是多種應(yīng)用的不錯選擇:
基因表達分析:在基因表達分析中,研究人員研究了來自其編碼基因的基因產(chǎn)物的發(fā)生或活性。這提供了生物活性的敏感指標;基因表達模式的變化反映了生物學(xué)過程的變化。復(fù)用很容易擴展以捕獲其他基因座或覆蓋其他物種。1個
SNP基因分型:單核苷酸多態(tài)性(SNP)基因分型是衡量物種成員之間遺傳變異的方法。用于SNP基因分型的多重qPCR分析可通過節(jié)省樣品,試劑和時間來提高效率。
副本編號變化:當基因組部分重復(fù)且個體之間重復(fù)的次數(shù)不同時,就會發(fā)生拷貝數(shù)變異(CNV)。人類基因組包含許多CNV,其中一些與復(fù)雜疾病有關(guān)。許多其他原因?qū)е逻z傳性疾病??茖W(xué)家使用多重qPCR來同時研究多個CNV,從而促進了對多種疾病的研究。
轉(zhuǎn)基因植物檢測。轉(zhuǎn)基因生物(GMO)監(jiān)測的目的是發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因生物對人類健康和環(huán)境的潛在不利影響,并在必要時減輕其傳播。用于檢測轉(zhuǎn)基因植物的PCR分析通常針對P35S或TNOS DNA序列。但是,由于P35S啟動子衍生自花椰菜花葉病毒(CaMV),因此這些檢測方法可以從被這種天然病毒感染的非轉(zhuǎn)基因植物中產(chǎn)生假陽性結(jié)果。多路復(fù)用技術(shù)使科學(xué)家可以在單個反應(yīng)中將受CaMV感染的植物與GM植物區(qū)分開。2
快速病原體鑒定:諸如qPCR之類的分子測試可以使早期調(diào)整抗微生物治療,并補充危重患者的血液培養(yǎng)??茖W(xué)家可以使用多重qPCR來同時測試血流中的幾種潛在病原體,這可以加快患者治療的速度。3
流行病學(xué)和藥物療效監(jiān)測:準確定量評估各種寄生蟲或微生物感染是解釋流行病學(xué)數(shù)據(jù)的關(guān)鍵。它還有助于監(jiān)視大規(guī)模治療功效研究。多重qPCR測定法可幫助研究人員以比單一測定法更廣泛的范圍追蹤感染的發(fā)生率,強度和對治療的反應(yīng)。